Nel nostro studio precedente, la stimolazione laser a basso livello (LLL) sul palmo con una frequenza di stimolazione di 10 Hz era in grado di indurre una significativa attivazione cerebrale in soggetti normali. I cambiamenti elettroencefalografici (EEG) causati dalla stimolazione dei diodi a emissione di luce (LED) nei soggetti normali non sono stati studiati. Questo studio mirava a identificare gli effetti della stimolazione LED sul cervello umano utilizzando l’analisi EEG. Inoltre, il dosaggio è stato aumentato di 4 volte rispetto al precedente studio LLL. Lo stimolatore a serie di LED (6 LED, lunghezza d’onda centrale 850 nm, potenza di uscita 30 mW e frequenza operativa 10 Hz) è stato utilizzato come fonte di stimolazione. È stato scoperto che la stimolazione LED induce variazioni significative nell’attività alfa nelle regioni occipitale, parietale e temporale del cervello. Rispetto al precedente studio sui laser a basso livello, il LED ha effetti simili sull’EEG nell’attività alfa (8–12 Hz). La potenza theta (4–7 Hz) è aumentata significativamente nella regione posteriore della testa del cervello. L’effetto è durato almeno 15 minuti dopo la cessazione della stimolazione. Al contrario, l’intensità beta (13–35 Hz) nell’area parietale destra è aumentata in modo significativo e in questo studio è stata osservata una risposta alla dose bifasica.

1. Introduzione

Il ritmo delle onde cerebrali è associato allo stato fisico e mentale. Il ritmo alfa è l’onda cerebrale dominante negli adulti normali che sono svegli e rilassati con gli occhi chiusi e diminuisce in condizioni di occhi aperti o mentalmente attivi [1]. La comparsa dell’onda theta è considerata uno dei segni di sonnolenza [2]. Negli individui con uno stato di allerta o ansia, l’attività beta aumenterà [3]. Le onde delta sono la principale attività EEG osservata durante il sonno profondo. Il modello di cambiamento più dominante in diversi tipi di disturbi, tra cui il disturbo da deficit di attenzione e iperattività (ADHD), la schizofrenia e il disturbo ossessivo-compulsivo (DOC), è l’aumento di potenza sulle frequenze più basse (delta e theta) e la diminuzione sulle frequenze più alte (alfa, beta e gamma) [4]. Le onde alfa nel gruppo depresso sono risultate inferiori rispetto al gruppo normale sia in condizioni di occhi chiusi che di occhi aperti [5].

Il ritmo alfa è un importante biomarcatore per riconoscere lo stato fisiologico. Quando le persone si sentono rilassate e sveglie con gli occhi chiusi, il ritmo alfa è l’onda cerebrale dominante [1]. Inoltre, le oscillazioni alfa indotte possono essere utili per alleviare il dolore. La stimolazione transcranica a corrente alternata (tACS) può migliorare l’oscillazione alfa nella corteccia somatosensoriale per ridurre la lombalgia cronica [6]. La risposta alla guida fotica è uno dei metodi efficaci per influenzare l’attività cerebrale. La stimolazione fotica con una frequenza pari o vicina alla frequenza nativa del ritmo dominante posteriore può aumentare l’ampiezza di questo ritmo. La stimolazione con altre frequenze flash può causare una risposta fotica che sostituisce o sovrappone il ritmo dominante posteriore [7]. La stimolazione con luce stroboscopica rossa può aumentare in modo rapido e potente l’ampiezza del ritmo alfa nella corteccia occipitale [8]. Inoltre, è stata applicata una stimolazione fotica con occhiali a LED e si è scoperto che i ritmi alfa dei soggetti erano fortemente influenzati dalle diverse frequenze di stimolazione [9]. Oltre alla riconosciuta efficacia clinica della stimolazione visiva, l’attività EEG può essere influenzata anche da altre modalità di stimolazione, tra cui quella elettrica [10], quella musicale [ 11] e stimolazione magnetica [12]. In studi precedenti, è stato utilizzato un laser a bassa potenza per stimolare il palmo dei soggetti in condizioni di occhi aperti e chiusi, e tale stimolazione ha causato cambiamenti significativi nell’ampiezza delle onde cerebrali dei soggetti [1314].

I LED irradiano luce non coerente, mentre i laser irradiano luce coerente. Molti studi hanno dimostrato che LED e laser hanno effetti simili [1517] . Fino ad ora, ci sono pochi studi di ricerca che discutono la stimolazione dei LED sulla pelle per indurre l’attività delle onde cerebrali. Lo scopo di questo studio è indagare se la luce LED può evocare l’attività delle onde cerebrali.

2. Metodi

Il protocollo dello studio è stato approvato dal Comitato Etico Istituzionale del Ming-Sheng General Hospital. Ad ogni partecipante è stato richiesto di firmare un consenso informato. Questo studio è stato condotto in conformità con la Dichiarazione di Helsinki. Il processo è stato eseguito presso il National Taiwan University Hospital.

2.1. Partecipanti

Venti studenti universitari sani (età media: 21,5 ± 1,3 anni, 12 uomini e 8 donne) sono stati reclutati per questo studio. Gli stati fisici medi dei partecipanti sono elencati nella tabella 1. Ciascun soggetto è stato sottoposto a due prove in giorni diversi. Hanno ricevuto la stimolazione LED (il gruppo LED) in uno studio e la stimolazione LED fittizia (il gruppo di controllo) nell’altro studio. Nella prima prova, ciascun soggetto è stato assegnato in modo casuale al gruppo LED o al gruppo di controllo. Nella seconda prova, condotta pochi giorni dopo, ciascun soggetto è stato assegnato al gruppo a cui non era stato assegnato nella prova precedente. I criteri esclusivi erano i seguenti: (a) una storia di disturbi psichiatrici come depressione maggiore, abuso di sostanze, schizofrenia o disturbo paranoico; (b) malattia cardiopolmonare; e (c) uso di farmaci attualmente.

2.2. Disposizione della serie di LED e calcolo della dose

Una serie di sei LED disposti a triangolo, come mostrato nella Figura 1(a), è stata utilizzata per irradiare il vicino infrarosso ( NIR) luce sul palmo dei soggetti. In questo studio sono stati utilizzati LED NIR (modello S1VS0850IR002A0Z, Millennium Communication Co., Ltd., Taiwan). La lunghezza d’onda centrale, la potenza in uscita, la frequenza operativa e il ciclo di lavoro dei LED erano rispettivamente di 850 nm, 30 mW, 10 Hz e 50%. Il punto luminoso del LED potrebbe essere considerato un cerchio. L’area del punto luminoso sulla pelle era di circa 28 mm2. Pertanto, la densità di energia è stata calcolata pari a circa 32 J/cm2 per un trattamento di 10 minuti, il dosaggio di ciascun LED era 9,0 J e l’energia totale era 54,0 J. I parametri di irradiazione del LED sono elencati nella tabella 2. Nel nostro studio precedente, la potenza di uscita di ciascun diodo laser era di 7,0 mW, il dosaggio era di 2,1 J e l’energia totale era di 12,6 J per sei diodi laser [13]. Il dosaggio in questo studio è 4,2 volte superiore a quello dello studio sul laser. Lo schema di questa stimolazione è mostrato nella Figura 1(b).

2.3. Procedura sperimentale

Ogni soggetto si è seduto su una poltrona e ha posizionato il palmo della mano sinistra sul dispositivo LED. Al soggetto è stato chiesto di rilassarsi, tenere gli occhi aperti ed evitare di fare qualsiasi movimento. Nel gruppo LED i LED sono rimasti accesi per 10 minuti. Nel gruppo di controllo i LED non erano accesi. All’inizio di ogni prova, ciascun soggetto si è rilassato per 5 minuti per raggiungere uno stato fisiologico stabile. L’attività EEG in corso è stata registrata a occhi aperti in tre fasi (6 sessioni): prima della stimolazione (baseline 5 minuti, sessione 1), durante la stimolazione (stimolazione LED, 10 minuti, sessioni 2 e 3) e dopo la stimolazione (post -Stimolazione LED, 15 minuti e sessioni 4, 5 e 6). Questa procedura era la stessa seguita nel nostro studio precedente [1314].

2.4. Registrazione e misurazione EEG

In questo studio è stato utilizzato uno strumento EEG (Neurofax modello EEG-1000, NIHON KOHDEN). Secondo il sistema internazionale 10-20, come mostrato nella Figura 2, gli elettrodi Ag/AgCl posizionati sul cuoio capelluto sono stati utilizzati per registrare la variazione dell’attività cerebrale. È stata utilizzata una tecnica di registrazione bipolare per registrare le differenze di potenziale in Fp2-F4, F4-C4, C4-P4, P4-O2, Fp1-F3, F3-C3, C3-P3, P3-O1, Fp2-F8, F8- T4, T4-T6, Fp1-F7, F7-T3 e T3-T5. Ogni serie di dati EEG (epoca di 5 minuti) è stata trasformata nella banda EEG (μv2) con Fourier veloce trasformata (FFT) in quattro bande di frequenza: delta (0,5–3,5 Hz), theta (4–7 Hz), alfa (8–13 Hz) e beta (13–50 Hz). Per ciascuna sessione, è stata calcolata la media delle quattro potenze di banda delle epoche valide e sono state costruite mappe FFT di diverse sessioni utilizzando Neurofax versione 05–80. Il diagramma di flusso dell’analisi del segnale EEG è mostrato nella Figura 3.

2.5. Analisi statistica

È stato utilizzato un test accoppiato a due code t per confrontare la differenza nella potenza della banda EEG prima e dopo il LED effettivo o fittizio stimolazione. La potenza registrata a Fp2-F4, F4-C4, C4-P4, P4-O2, Fp1-F3, F3-C3, C3-P3, P3-O1, Fp2-F8, F8-T4, T4-T6, Fp1- Sono stati studiati F7, F7-T3 e T3-T5. La media e la deviazione standard dei valori calcolati sono state espresse come media ± SD. Tutte le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando il software SPSS e i risultati con un valore <0,05 sono stati considerati statisticamente significativi.

3. Risultati

3.1. Attività alfa ed effetto latente

Ci sono sei sessioni nello studio. La potenza alfa della sessione 1 (riposo) e della sessione 3 (stimolazione LED) è stata confrontata perché la sessione 3 rappresenta la variazione massima in sei sessioni. La densità spettrale di potenza media (PSD) dei soggetti nelle posizioni della corteccia parietale, occipitale e temporale durante le sessioni 1 e 3 è presentata nella Figura 4. La PSD nella banda alfa è stata spostata verso le basse frequenze dopo la stimolazione. Inoltre, anche i PSD totali nella banda alfa sono stati ampliati. Per ridurre l’influenza di alcuni oggetti è stato utilizzato un calcolo di potenza normalizzato. La potenza media calcolata per ogni sessione è stata normalizzata dividendola per i dati corrispondenti della prima sessione. La figura 5 illustra i cambiamenti temporali nell’intensità normalizzata della potenza EEG nella banda alfa. Nel gruppo LED, la potenza alfa è aumentata significativamente dalla sessione 2 alla sessione 6, in queste aree (C3-P3, C4-P4, P3-O1, P4-O2, T3-T5 e T4-T6). Un effetto simile è stato osservato su entrambi i lati della regione posteriore della testa. Durante la sessione dalla 2 alla sessione 3, l’intensità è stata aumentata mediante irradiazione LED. Inoltre, l’intensità dopo l’irradiazione LED è stata mantenuta dalla sessione 4 alla sessione 6, sebbene si sia verificata una leggera diminuzione. L’effetto latente è stato mantenuto per almeno 15 minuti dopo la cessazione del LED. Nel gruppo di controllo, non c’era alcuna variazione nel potere alfa nella regione posteriore della testa.

La maggior parte della potenza EEG nella banda delta non ha alcun significato significativo, quindi i risultati sono stati omessi per una ragione concisa.

Le variazioni significative della potenza normalizzata nella regione del cervello con stimolazione LED sono elencate nella Tabella 3 e le regioni interessate con stimolazione laser Sono stati inclusi anche [13].

4. Discussione

4.1. Attività delle onde cerebrali nella banda di frequenza EEG nella stimolazione LED

Il ritmo alfa è l’onda cerebrale dominante negli adulti normali che sono svegli e rilassati con gli occhi chiusi. Il ritmo alfa è localizzato principalmente nella regione posteriore della testa e diminuisce in condizioni di occhi aperti o mentalmente attivi [1]. La stimolazione audiovisiva (AVS) è un metodo familiare e utile per influenzare l’attività delle onde cerebrali. Il trascinamento delle onde cerebrali era armonico con la frequenza di stimolazione visiva, ma l’effetto latente è breve, non è stato trovato alcun modello coerente di potenza eccitata persistente pochi minuti dopo l’AVS [18]. In questo esperimento, la PSD media dei soggetti nelle posizioni della corteccia parietale e temporale durante la sessione 3 è stata aumentata e spostata verso frequenze più basse rispetto allo stadio di riposo nella Figura 4< un i=6>. Il fenomeno è stato causato dalla stimolazione LED operata a 10 Hz. L’attività alfa normalizzata è aumentata rapidamente durante e dopo la stimolazione LED nel gruppo LED nella Figura 5. Le regioni colpite erano le regioni occipitale, parietale e temporale. La stimolazione LED ha esercitato un effetto latente sul ritmo alfa. L’effetto potrebbe persistere per almeno 15 minuti dopo la cessazione del LED. Sulla base dei risultati sperimentali, la stimolazione LED sul palmo della mano ha l’effetto di indurre l’attività del ritmo alfa e le regioni interessate sono state distribuite posteriormente. L’influenza era come AVS, ma il tempo di latenza era più lungo. Nel gruppo di controllo non è stata osservata alcuna variazione significativa nel ritmo alfa.

Le onde theta nell’intervallo sono generalmente considerate anormali negli adulti svegli. L’emergere delle onde theta è considerato uno dei segni distintivi dell’insorgenza della sonnolenza [2]. Inoltre, l’attività theta è associata all’attenzione e all’elaborazione efficiente dei compiti cognitivi e percettivi [319]. Nel presente studio, l’attività theta è risultata aumentata nella regione posteriore della testa nel gruppo LED. In particolare, la regione interessata si trovava nell’area temporale destra (T4-T6) e la sua intensità era aumentata in modo significativo. Potrebbe essere correlato all’effetto controlaterale, al LED stimolato nel palmo sinistro e all’onda theta attivata nell’emisfero destro del cervello.20]. Lagopoulos et al. hanno scoperto che sia le attività alfa che quelle theta aumentavano durante la meditazione non direzionale a occhi chiusi. L’attività theta era significativamente più elevata nelle regioni frontale e temporale-centrale rispetto alla regione posteriore [

L’attività beta aumenta negli individui che sono vigili [3], ansiosi o che hanno gli occhi aperti. L’attività beta è solitamente predominante nelle regioni frontali e centrali. Nel presente studio, sono state osservate lievi variazioni e nessun cambiamento significativo indotto dai LED nella potenza beta, tranne nella posizione C4-P4, di cui parleremo più avanti.

Le onde delta non si osservano negli adulti normalmente svegli, ma costituiscono la principale attività EEG osservata durante il sonno profondo. L’ammiccamento o il movimento del bulbo oculare solitamente causano artefatti, che assomigliano alle onde EEG nella gamma delta. In questo studio, poiché non è stata riscontrata alcuna variazione significativa nel potere delta, i dati sono stati omessi.

4.2. Attività delle onde cerebrali nella luce coerente rispetto alla luce non coerente

Diversi studi hanno discusso le differenze negli effetti biologici esercitati dall’irradiazione luminosa coerente e non coerente. Rochkind et al. hanno riferito che la terapia laser a basso livello (LLL) (632,8 nm, 15 mW, 10 J/cm2) ha esercitato un effetto a breve termine su un ferito nervo periferico, ma la luce non coerente (660 nm, 10 mW) ha esercitato un effetto leggermente inferiore [21]. Stasinopoulos et al. ha utilizzato la terapia Ga-As LLL (904 nm, 3,51 J/cm2; un totale di sei punti) e luce policromatica non coerente polarizzata (luce Bioptron: 480 –3400 nm, 2.4 J/cm2) in combinazione con un programma di esercizi per il trattamento della tendinopatia laterale del gomito [22 ]. Non hanno riscontrato differenze significative nella riduzione del dolore e nel miglioramento della funzione tra la terapia Ga-As LLL e i gruppi luminosi Bioptron. Bertoloni et al. scoperto cambiamenti biochimici e morfologici simili nell’ Escherichia coli dopo l’irradiazione con luce coerente o non coerente [23< a i=14>]. Demidova-Rice et al. ha confrontato gli effetti della luce coerente (laser He-Ne) e della luce non coerente sulla guarigione delle ferite da escissione nei topi e non ha identificato differenze significative nella curva di guarigione media ottenuta utilizzando le sorgenti luminose [16]. Significa che la luce non coerente e la luce coerente hanno un effetto biologico simile con parametri simili.13], i principali parametri che influenzano la stimolazione luminosa a bassa potenza sullo stato fisiologico sono la lunghezza d’onda dell’irradiazione, la potenza, la dose , la frequenza operativa e la durata temporale, mentre la luce coerente e polarizzata non hanno effetti significativi. In questo studio, abbiamo riscontrato un aumento evidente e significativo del ritmo alfa nella regione posteriore, il fenomeno è simile alla stimolazione laser [24]. Negli studi bibliografici di Karu [22] e la gamma di lunghezze d’onda della luce policromatica era ampia dal visibile all’infrarosso (480–3400 nm) [2117]. Per quanto riguarda la riparazione dei tessuti nei ratti diabetici, hanno osservato che il trattamento con i LED era più efficace nel ridurre le dimensioni della ferita rispetto al trattamento con il laser. In letteratura si possono trovare dibattiti su eventuali differenze negli effetti dell’irradiazione luminosa coerente e non coerente. Tuttavia, diversi parametri sperimentali potrebbero essere responsabili delle differenze negli effetti biologici esercitati da questi due tipi di sorgenti luminose. Ad esempio, i dosaggi di irradiazione della luce non coerente non sono stati menzionati in alcuni studi [17) [2]. Agnol et al. hanno riferito che la luce LED non coerente (640 nm con 40 nm di larghezza di banda completa a metà massimo) esercitava effetti di biostimolo simili o addirittura migliori rispetto alla luce laser coerente (660 nm, 6 J/cm

4.3. Dosaggio e via di conduzione

Per quanto riguarda i cambiamenti EEG indotti da LED e laser [13], entrambe le sorgenti luminose esercitano effetti simili sulla potenza EEG nella banda alfa di onde cerebrali. Vale la pena menzionare che l’intensità normalizzata dell’attività alfa durante e dopo la stimolazione LED era 1,50-1,55 volte superiore all’intensità iniziale in C3-P3 e C4-P4 nelle sessioni 2 e 3; tuttavia, nello studio con il laser [13], l’incremento è 1,20–1,35. Confrontando la stimolazione LED e laser, l’intensità normalizzata dell’attività alfa indotta dall’irradiazione LED era superiore a quella indotta dall’irradiazione laser. Questa differenza può essere attribuita al dosaggio dell’irradiazione; il dosaggio del LED (54,0 J) era superiore al dosaggio del laser (12,6 J) [13]. Il potere alfa è aumentato significativamente nelle regioni occipitale, parietale e temporale, come mostrato nella piccola figura nell’angolo sinistro della Figura 8. Inoltre, il potere beta nella posizione C4-P4 è stato aumentato lentamente nella sessione 2 (sessione di stimolazione) e aumentato nelle sessioni 4 e 5, e ha un significato significativo. Tuttavia, nel nostro precedente studio sul laser [13], la potenza beta nella posizione C4-P4 non è cambiata. Ciò significa che più potente è la stimolazione, maggiore è la risposta nervosa. Il palmo sinistro dei soggetti è stato stimolato con una stimolazione maggiore, l’attivazione C4–P4 rifletteva la stimolazione del palmo, come mostrato nella piccola figura nell’angolo destro della Figura 8 [2526] e si può osservare anche l’attivazione della corteccia sensomotoria nell’infanzia [26]. Secondo i risultati dei test LED e laser, maggiore è la dose, maggiori sono le attività alfa e theta ed esiste una correlazione positiva tra la dose e le attività alfa e theta. Al contrario, un dosaggio più elevato del LED ha indotto l’attività beta dell’emisfero parietale destro, ma un dosaggio laser più basso ha ridotto l’attività beta [13]. La risposta sembra seguire la legge di “Arndt–Schulz” ed è stata osservata una risposta alla dose bifasica [27]. Ciò significa che l’energia insufficiente non può promuovere effetti biologici. Se fosse applicata più energia oltre la soglia, la risposta sarà raggiunta. Ma troppa energia provoca un’inibizione biologica.

4.4. Effetto nella luce pulsata

Anche la frequenza degli impulsi è un fattore che determina l’effetto biologico. L’assorbimento di calcio nei macrofagi aumenta dopo l’irradiazione con laser a diodi pulsati [28]. La chemiluminescenza del topo viene migliorata dopo essere stato irradiato con un laser pulsato [29]. È stata studiata la differenza tra il laser pulsato e l’energia elettrica per la stimolazione dei nervi periferici nel modello animale [30] e si è dimostrato che l’uso di un laser pulsato il laser presenta notevoli vantaggi rispetto ai mezzi elettrici standard per l’eccitazione dei potenziali muscolari nel nervo periferico. Matteo et al. hanno scoperto che la luce ad onda continua (CW) non produce alcuna influenza significativa sulla crescita degli assoni. Utilizzando invece la luce pulsata, il fascio è riuscito a modificare la traiettoria degli assoni, attirando circa il 45% dei casi osservati verso il punto del fascio [31]. Confrontando gli effetti della luce pulsata e CW nella terapia con luce a basso livello, è dimostrato che la luce pulsata ha un effetto diverso rispetto alla luce CW e che la luce pulsata ha un effetto migliore [32 ].

In questo studio, la stimolazione LED ha indotto una significativa attivazione dei ritmi alfa in soggetti normali. Questa scoperta implica che la stimolazione LED operata a frequenze diverse simili alla stimolazione laser può avere il potenziale di indurre onde cerebrali specifiche negli individui. Pertanto, la stimolazione LED con la potenza LED e la frequenza operativa appropriate può consentire a una persona di rilassarsi o addormentarsi facilmente.

5. conclusione

Questo studio ha applicato la stimolazione LED a soggetti normali e sono stati analizzati i cambiamenti indotti dalla stimolazione nella potenza dell’EEG. Il potere alfa è aumentato significativamente nelle regioni occipitale, parietale e temporale. La potenza theta è aumentata significativamente nella regione posteriore della testa. I miglioramenti sono stati mantenuti per almeno 15 minuti. Abbiamo scoperto che LED e laser esercitano effetti simili sul ritmo alfa. L’effetto dipende dal dosaggio della stimolazione e in questi studi è stata osservata una risposta bifasica alla dose. Maggiore è il dosaggio, maggiore è l’attività alfa in entrambi gli emisferi. Al contrario, un dosaggio LED più elevato (54,0 J) ha indotto l’attività beta dell’emisfero parietale destro, ma un dosaggio laser più basso (12,6 J) ha ridotto l’attività beta. La limitazione principale del presente studio si riferisce al soggetto reclutato in questo studio. Il presente studio non è informativo riguardo alla gravità o al periodo di tempo dei disturbi del sonno. La qualità del sonno è un fattore importante che influenza l’esito delle onde cerebrali dopo la stimolazione luminosa. Studi futuri potrebbero tentare di catturare altri indicatori più dettagliati e oggettivi della qualità del sonno. Inoltre, è stata trovata la finestra terapeutica per indurre onde cerebrali specifiche tramite la stimolazione luminosa. Riteniamo che i risultati di questo studio abbiano implicazioni pratiche in campo medico. Ad esempio, l’utilizzo di una dose (o frequenza) più elevata di stimolazione luminosa può avere una potenziale applicazione nel migliorare l’attenzione degli studenti. Al contrario, l’uso di una bassa dose di stimolazione luminosa può migliorare i problemi del sonno per le persone che soffrono di insonnia. Vale la pena approfondire lo studio.

Disponibilità dei dati

I dati utilizzati per supportare i risultati di questo studio sono inclusi nell’articolo.

Conflitto di interessi

Gli autori dichiarano che non sussistono conflitti di interesse riguardo alla pubblicazione di questo articolo.

Ringraziamenti

Gli autori sono particolarmente debitori al Dr. Si-Chen Lee (ex presidente dell’Università Nazionale di Taiwan (NTU)) e allo staff (Pi-Hsuan Shieh, Hsun-Wen Hsu, Yu-Huei Tseng e Yea-Huey Lin) nel Dipartimento di Neurologia dell’Ospedale NTU per il loro sostegno a questo studio. Gli autori sono inoltre grati al Consiglio scientifico nazionale della Repubblica cinese per il sostegno finanziario (contratto n.: NSC 102-2320-B-130-001 e NSC104-2221-E-130-005).